猴头菇菌种生产需要哪些设施,银耳栽培应当选

银耳无菌操作设备又叫接种设备,是用来分离、扩大、转接栽培银耳各级菌种的专用设备。常用的有接种箱、接种室、塑料膜接种罩等。我们还将介绍银耳栽培的其他用具及设备。

猴头菇是我们熟悉的一种食用菌,营养价值高,它是由猴头菇菌种的培养而来。猴头菇菌种的培养很关键,关系到它是否能生长,在菌种生产过程中我们需要运用到很多设施才能保证菌种生产顺利,下面一起来看看吧。

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1、接种箱

1.灭菌设备灭菌设备主要有高压灭菌锅和常压灭菌灶

又叫无菌箱,用于银耳菌种分离和菌种扩大、移接,无菌操作,是接种使用的基本设备。根据生产需要,分单人操作式和双人操作式两种。

(1)高压灭菌锅是菌种生产上最重要的设备,它是在一个密闭的金属耐压容器中,通过煤、电等对水进行加热产生水蒸气,

双人接种箱体积较大,除了接种母种、原种外,还可接种栽培种和生产袋。双人式接种箱的前、后各有1扇约呈70。倾斜、能启闭的玻璃窗,窗下箱体上开有两个圆孔,孔径15—17厘米,两孔中心间距40~50厘米,孔上装有布袖套,袖口有松紧带。如在孔外设置能推移开关的小门效果更好。箱内顶部各安装1支15瓦或30瓦的紫外线灯和1支40瓦的日光灯,一是利用紫外线灯照射杀菌,二是利用日光灯照明。顶外部两端各打1个直径8~10厘米的圆孔,封上口罩式的棉纱布,以利于补充箱内的氧气及箱内的热能散发。接种箱内外各面应刨制光滑并涂上白漆,箱体各接缝处要严格密封。另外,可在箱的底部一侧边缘挖一个边长为10厘拳的正方形口或直径10厘米的圆形口,用一块可推拉的活动木板糍着,以用于清扫箱内垃圾。双人式接种箱的箱体长140~160厘涨,宽80~100厘米,高75~85厘米,箱腿高65~80厘米。

并利用水蒸气驱尽锅内空气,同时使锅体内的气压升高,从而产生饱和热蒸汽,进而形成高温(一般为127℃),并以此高温来彻底杀灭杂菌,实现培养基的灭菌。常用的高压灭菌锅主要有:手提式高压灭菌锅,主要用于母种培养基的灭菌;卧式高压灭菌锅和立式高压灭菌锅,主要用于原种和栽培种培养基的灭菌。

单人接种箱的体积小,适合于母种和原种的接种操作,其结翰与双人式基本相同,通常体积相差一半,仅在一侧设窗、开孔,影隋体长100~120厘米,宽55~65厘米,高50~60厘米,箱腿高65~80厘米。

(2)常压灭菌锔是生产栽培种的灭菌设备,在常压下产生100℃饱和蒸汽进行灭菌。常压灭菌锅由灭菌柜和蒸汽发生系统组成,灭菌柜根据材料的不同有砖混结构的、钢板式结构的等, 而蒸汽发生系统更是多种多样且规模较大,利用锅炉作为蒸汽的来源,一般规模的可用蒸汽炉、铁桶式蒸汽发生器、普通的铁锅等。常压灭菌锅的优点是制作简单、造价低。但缺点是升温较慢,耗能较大,灭菌时间长,灭菌时冷凝水多、不好操作,因此在生产上不提倡使用。

接种箱的消毒,可用福尔马林 高锰酸钾进行混合熏蒸30~40分钟;最好采用气雾消毒剂消毒。在消毒的同时或消毒之后,鼙用紫外线灯照射30分钟则更好。如只是少量的接种工作,则可在使用前喷1次5%苯酚溶液,并同时用紫外线灯照射20分钟即可。紫外线灯照射期间,人员不要在场,以免对人的眼睛及身体造成伤害。

2.接种设备

2、接种室

接种设备主要有:接种箱、超净工作台及常用接种工具等。

又叫无菌室或操作室,用于分离、移接母种、原种馘麓培种,一般大规模生产时采用。接种室要求密闭,空气静止;经常消毒,保持无菌状态。它由外面缓冲间和里面接种间组成。缓冲间面积2~3㎡,高2~2.5米,内设洗手处,并备有专用工作服、鞋、帽、口罩、小型喷雾器和常用消毒剂等。接种间不宜过大,否则不易保持灭菌状态;面积在6~10㎡,高2~2.5米,内设接种所需设备和物品。工作台设在接种间中央或靠墙处,要求水平、光滑。通气窗设在室内顶上部,窗孔直径10~15厘米,并用多层棉纱布夹棉花严封。有条件的可安装空气过滤器。接种室要能密闭,室内要平整、光滑,以便擦洗消毒。里、外两间的门应错开方向,不在一条直线上,以免开启时产生空气对流。最好采用铝合金推拉门。有条件的情况下,可同时建两个以上的缓冲间,无菌效果会更好。接种间的门应设在离工作台最远的位置。工作台上方和缓冲间各安装1支30—40瓦紫外线灯和40瓦日光灯,用于灭菌和照明。紫外线灯灯管与台面相距约80厘米,勿超过1米,以加强灭菌效果。使用前要先用紫外线灯照射消毒15—30分钟,或用5%苯酚、3%来苏儿溶液喷雾后再开灯灭菌。空气消毒后经过30分钟,送入准备接种的培养基及所需物品,再开紫外线灯灭菌30分钟。接种时,紫外线灯要关闭,以免伤害工作人员的身体。

(1)接种箱是一种为接种创造一个无菌空间,满足无菌操作要求的专用设备。生产上的接种箱常为木质结构,规格多种多样,有单人操作的、双人操作的。接种箱顶部两侧呈倾斜状,安装玻璃窗扇,便于操作时观察和取放物品,但窗扇必须密闭。箱底部两侧箱壁上有两个椭圆形的操作孔,操作孔装袖套,接种时手由袖套伸入箱内操作。箱内有紫外灯和日光灯。接种箱应放在无菌的专用接种室内,接种箱应保持清洁、无杂物。接种前、后箱内都应用0. 1%高锰酸钾溶液擦洗,再用清洁干布揩干。

接种室灭菌时,为避免对人体造成危害,一般不用甲醛等刺激性药剂,而是用碘伏及紫外线灯等进行灭菌;若用甲醛等刺激性药剂,熏蒸(或喷洒)过后,必须打开门窗基本散净毒气后,再用296—3%来苏儿溶液等刺激性小的药剂喷雾消毒,然后才能进行接种。如果采用接种箱、超净台、火焰或蒸汽接种,接种室就不需另隔缓冲间。

(2)超净工作台是一种过滤空气的局部平行层流装置,利用过滤灭菌的原理,把空气高效过滤除尘、洁净后,以垂直或水平层流状态通过操作区,在局部创造高洁净度的无菌空气,使工作台范围内成为无菌状态。超净工作台也要安装在无菌的接种室中,而且要定期清洗。接种室或超净工作台的洁净度可用简便方法检验:在接种的工作台上,以平均间隔位置摆放平皿3个,每个平皿内装营养丰富并经灭菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基约20 毫升。打开皿盖暴露培养基30分钟再盖上,于25℃培养48小时,检查菌落数,平均每个平皿中菌落不超过4个为除菌合格。 洁净度基本达到100级(国际标准:空气中大于或等于0.5微米的尘埃的量≤3.5粒/升)。

3、塑料膜接种罩

(3)常用接种工具菌种移接的工具大多是加工制作的,最普通的制作材料是自行车辐条。一般钢丝烧灼后容易生锈,所以制作接种工具最好使用不锈钢丝或镁合金钢丝。主要接种工具有以下几种:剪刀、镊子、接种针、接种环、接种钩、接种锄、接种铲、接种匙、接种刀。接种室内常用工具还有解剖刀、手术刀、酒精灯、搪瓷方盘、培养皿、烧杯、广口瓶(装酒精棉球)、菌种瓶架(固定菌种瓶用)等。

又叫接种帐等,可用塑料薄膜和竹竿或木材制作而成,作为简易接种室。它制作简便,成本低,可移动,能在普通房间等不同场所进行接种操作。对于无接种箱和接种室,而且生产量又较大的生产者,采用此罩进行接种操作,十分方便。

3.制种用具

①制作方法:用竹竿或木条制成一个长方体或正方体的框架,宽为2~3米,长为3~4米,高约2米。大小可根据接种量多少决定,但也不宜太大。如接种罩的体积过大,消毒杀菌药物用量较多,还不易创造无菌的环境。框架要求牢固,表面要光滑无尖状物,以防刺破塑料薄膜。框架制好后,在其上罩一个无缝隙的塑料薄膜,四周用沙袋或木板压住塑料薄膜,即成为一个接种罩。将接种罩放在干净的水泥地面上,若地面为土地面,应先在地面上铺上彩条编织布或较厚的干净塑料薄膜,以便于打扫卫生和进行消毒杀菌处理。另外,也可用宽7--8米、长9米的薄膜,在中部适当位置捆扎四个角,悬挂后即成。

主要有搅拌机、过筛机、装袋(瓶)机、电热恒温培养箱、生化培养箱、称量工具等。

②使用方法:将灭菌的料袋冷却后,堆码整齐,放上接种罩。杀菌处理后,再进行接种操作。杀菌方法同常规,既可用高锰酸钾与甲醛混合熏蒸杀菌,也可用气雾消毒剂熏蒸杀菌。气雾消毒剂与甲醛相比,杀菌效果一样,但气雾消毒剂的刺激气味较甲醛小。因此,用甲醛进行杀菌时,要待甲醛气体散去,无太大的刺激气味后,才可进行接种操作。此外,还可采取喷雾来苏儿液或新洁尔灭液进行杀菌处理。无论采用何种杀菌方法,用药后均不宜立即进行接种操作,需过1小时左右,待药物刺激性气味散去后,才能进入进行接种操作。另需注意,在夏:秋高温季节,一定要等料袋完全冷却至室温后,才可进行接种操作。要防止接种罩内温度上升过高,无法进行接种操作。每次接种结束后,搬出菌袋,打扫卫生,再进行下一次接种操作。在大型室内接种培养菌袋的,每次接完种后,只需移开接种罩,菌袋可就地堆码发菌。如接种罩上的塑料薄膜出现裂缝,要及时用不干胶胶布贴住。为了提高效率,可一次制作多个接种罩,同时或轮换使用。

(1)搅拌机主要用于将培养基中各种成分混合均匀的专业设备。由电动机、齿轮、三角皮带传动系统、离合器、搅拌室、 搅拌轴等部件组成。搅拌机分为叶轮式和螺旋式两种。代表型号为WJ-70,每小时可拌料800~1 000千克,每次投入料为每3 分钟40~50千克。大规模生产可选用近年新发明的自走式拌料机,每小时可搅拌5吨,且拌料均匀。

4、蒸汽接种装置

(2)过筛机用于清除木屑中的木块、碎石等杂物的专用机械,由机架、减速机组、传动系统、网壳、筛网等组成。

水沸腾时产生的热蒸汽在上升和扩散时,能把含有杂菌孢子的自然空气排开,在蒸汽中心附近形成一片小范围的无菌区。在蒸汽形成的无菌区域内接种的方法就叫蒸汽接种法。

(3)装袋(瓶)机是将混合好的培养料装入袋(瓶)的机械,可代替手工装袋(瓶),使生产者从繁重的体力劳动中解放出来。有冲压式、手推转式、手压式等多种形式,一般全机由机架、喂料装置、螺旋输送器、传动操作系统、电动机等组成,装料松紧度以手托挤来控制。据不完全统计,国产装袋(瓶)机型号有30多种,其中有代表性的有ZPD-103A、GE、ZDP3、ZPD- 1、6ZP-500A等。

蒸汽接种法需配备接种室和蒸汽发生装置。接种室用一般房间即可。蒸汽发生装置有两种设计方法,一种设在室内,一种设在室外。室内装置由火炉、烧水容器、操作台组成。火炉可用煤球炉或电炉,容器可用中型或大型铝锅代替。锅中放入适量清水,再放上箅子,箅子上放置消过毒的接种工具。操作时,锅盖拿掉,敞开锅,在锅上方蒸汽无菌区内实施接种。室内装置设置简便,但接种量较小,只适于少量菌种移接。室外装置由火炉、容器、送汽管和操作台等组成。火炉、容器设在室外,操作台设在室内,送汽管用于连接容器和操作台。容器可用普通铝锅或家用压力锅,送汽管可用塑料管或橡皮管。在锅盖上开一个和送汽管口径相吻合的圆孔。送汽管的一头插入圆孔中固定密封好,另一头伸进接种室。接种台面板中央开一个直径10--15厘米的圆孔,送汽管的一端就用固定架固定在圆孔中心下方5厘米处。锅内加水燃烧产生的蒸汽通过送汽管由台面圆孔内喷出,即可进行接种操作。室外接种法接种量较大,适宜于大规模生产。

(4)电热恒温培养箱 电热恒温培养箱为流式结构,冷空气从后部风孑L进入,经电热器加热后从两侧空间对流上升,并由内胆左、右侧小孑L进入内室。它适用于猴头菇母种、原种的恒温培养,猴头菇菌种的培养温度以25℃为佳。

接种前,先将室内打扫干净,然后关闭门窗,减少空气流通,再向空中喷洒清洁水雾,让空气中飘浮的杂菌孢子自然沉落。接种时需要两人配合,一人负责移接菌种,另一人负责被接种的瓶(袋)开口和封口。在接种过程中,所用物品必须置于蒸汽出口上方10~20厘米高度的蒸汽范围内,并要注意防止蒸汽烫伤菌种块或双手。

(5)生化培养箱温度可调并且恒温效果更精确。一年四季都能使用。既可作猴头菇菌种的培养用,也可将温度调到4℃, 进行菌种的保藏。

蒸汽接种法,设备简易,操作方便,无菌程度较高,接种质量可靠。由于菌种得到无菌蒸汽的湿润,比在酒精灯上接种恢复得还快。另外,蒸汽接种法不使用化学药品,还可使接种人员和菌种免受杀菌药物带来的不良影响。但此法接种的成品率比常规的箱内接种稍低,在高温季节也不宜采用。而且在一个接种室内也不能连续长时间操作,以免引起一氧化碳中毒。有鉴于此,最好将室内接种改为在卫生、干净、避风的棚下进行。

(6)称量工具 有天平、磅秤、杆秤等,用于培养基的称量。

5、超净工作台

4.制种用消毒剂

又称净化工作台或净化操作台,是目前国内外先进的空气净化设备(图4-18)。按操作方式分,则有单人操作、双人对置操作和双人平行操作等几种。

主要有酒精、高锰酸钾、气雾消毒剂、新洁尔灭等。

与常见接种设备相比,超净工作台的先进性、可靠性主要表现在洁净度高,接种效果好,正品率高,可连续作业等方面。同时,因洁净空气不断向操作区排出,室内空气不断得到过滤,因此随着操作时间的延长,室内自净效果越来越好。

(1)酒精酒精是一种无色液体,作用机理是使微生物细胞脱水,菌体蛋白质变性,从而达到杀菌的目的。酒精的浓度在70%~75%时其杀菌效果最好,此浓度下酒精的穿透力最强,而

为提高超净工作台的使用效果,延长其使用寿命,应注意以下事项。

浓度过高或过低都达不到预期的消毒效果。因此使用时要将市售的95%的酒精稀释成70%~75%,用于消毒接种操作人员的手、 接种箱的四壁、接种工具、试管、菌种瓶的表面等。

第一,超净台应设置在洁净、明亮的室内,并安装紫外线灯。室内地面采用水磨面或涂刷地板漆,四周墙壁应涂上仿瓷涂料或油漆,保持光滑、无尘;尽力保持室内相对静止;工作服及帽子应选用沾尘量小的布料制作。

(2)高锰酸钾高锰酸钾常温下呈暗紫色结晶体状,有金属光泽,较稳定,极易溶于水,其水溶液呈紫红色。高锰酸钾是一种强氧化剂,能把微生物细胞中的蛋白质氧化,使之失去活性, 从而达到灭菌的目的。高锰酸钾除了可与福尔马林混合熏蒸消毒外,还可配成o.iO/

第二,室内需保持干燥,空气相对湿度控制在60%以下,梅雨季节应放置生石灰吸潮,以免高效过滤器在潮湿环境中滋生真菌而失效。

(3)气雾消毒剂 气雾消毒剂其主要成分为次氯酸,是一种广谱、高效、快捷、安全的消毒剂,其与福尔马林相比具有使用运输方便、消毒快捷、1对人体刺激性小等优点,是目前菌种生产上使用最广泛的接种用消毒剂。通常每立方米用量为3~5克, 点燃后熏蒸30分钟即可。

第三,配电系统有三相、单相两种。接电时应按正确相极安装,避免风机倒转而失效。如有条件最好安装稳压器,以防电压忽高忽低,烧坏电机或达不到预定的风量、风速,而达不到无菌的效果。

(4)新洁尔灭新洁尔灭对细菌、病毒有较好的杀灭作用, 而对真菌杀灭效果不佳。市售的5%新洁尔灭溶液使用时要加入20倍水稀释成o.25%的溶液,浸泡、喷洒、擦抹均可。使用时要注意:不能用铝及其他金属容器装,以防腐蚀生锈;不能与肥皂等阴离子洗涤剂同用;不可与过氧化物消毒剂合用。

第四,操作台(即出风口)上应尽量少放置与接种无关的器具和物品,以免阻碍出风口的正常气流或产生涡流而带菌。

猴头菇菌种生产需要灭菌设备灭菌设备主要有高压灭菌锅和常压灭菌灶、接种设备、制种用具、制种用消毒剂等等。在具体的培养过程中,注意事项有很多,需要我们一一掌握。

第五,操作前,先用新沽尔灭或来苏儿等消毒剂拭抹操作台面,切忌向操作区直接喷雾。室内空间可喷雾杀菌。然后接通电源,按下通风键钮,同时开启紫外线灯约30分钟即可开始接种。接种时,把紫外线灯关掉。

第六,接种工具应用常规酒精灯火焰灼烧灭菌,或用几层纸包扎灭菌后使用。

第七,超净台在连续使用的情况下,要每年向厂家邮购同型号的空气过滤器,按照说明书自行更换。将新过滤器粘贴在箱体前面的进风口上,连续使用2~3个月后,应取下用洗洁精或皂液洗净,以黏胶重新贴封,最好再更换新的。

6、臭氧净化嚣

又叫电子灭菌器或电子超净台,是一种新型高效的灭菌装置(图4-19)。它以空气为原料,把空气中的氧气变成具有强氧化作用的臭氧。臭氧是一种广谱杀菌剂,可杀死细菌的繁殖体和芽孢、病毒以及真菌等。空气中少量的臭氧有益于人体健康,但浓度过多会刺激人的呼吸及神经系统,对菌种也不利。因此,臭氧灭菌后要间分解时间才能进行接种。

采用臭氧净化器不需接种箱、接种室,普通房间内就可以放在桌面上操作,在机前接种不受任何条件限制,工效提高3~5倍,接种成功率几乎可达100%,无须任何化学药品。

7、接种工具

指进行银耳菌种的分离、移接时所用的工具。这些工具,除个别的需购买外,大多数还可以自己制作,而且一般自制的更适用。制作材料可选用自行车或三轮车辐条、旧电炉丝、不锈钢电焊条等,以用不锈钢电焊条制作较理想。

(1)接种棒:用于固定自制的接种针、接种环、接种饼等。由金属杆、胶木柄和前端螺母组成。医药仪器商店有售。

(2)接种针:用于挑取细小菌落或孢子等。可取废旧细电炉丝8—10厘米长,拉直、磨光,安装在接种棒上。如无专用接种棒,可用细钢丝将接种针固定在适当粗细的钢丝或自行车钢丝上。

(3)接种环:用于分离转管,或蘸取孢子悬液在斜面、平板上拖制、分离。将接种针的先端用尖嘴钳弯制1个圆圈即成。

(4)接种饼:用于蘸取孢子,抖落于斜面或平板上。将接种针的先端用尖嘴钳缠绕成圆形扁平状即可。

(5)接种刀:用于纵切斜面菌种和挑取茵丝体转管,也可用于组织分离时挑取、移接组织块等。可取长25厘米左右的不锈钢丝或除去外层焊药的不锈钢电焊条,一端烧红捶扁,砂轮打磨成菜刀状,刀口和前端要求薄而锋利,两边均留有刀刃。钢丝后端安装树脂柄或胶木柄。

(6)接种铲:用于挑取子实体组织块,或用于挑铲斜面或平板母种进行母种转扩,或用于母种转接原种。可取长约25厘米的不锈钢丝或除去外层焊药的不锈钢电焊条,将其一端烧红捶扁,砂轮打磨成铲状,前端要薄而锋利。在钢丝后端安装上树脂柄或胶木柄即可。若是用于原种转接栽培种或栽培种接种栽培袋(瓶)的接种铲,则要用直径为6~8毫米的钢筋或不锈钢棒等来制作,其长度约为28厘米。

(7)接种锄:用于横切斜面母种,或直接切断母种斜面移接入原种料瓶内。也可用于刮除菌种表面的老化菌丝、子实体原基等。取长约25厘米的不锈钢丝或除去外层焊药的不锈钢电焊条,将其一端烧红捶扁,砂轮打磨成铲状,前端刀刃要锋利;在火炉上烧红后,将前端弯曲成90。角,使之呈锄状。在钢丝后端安装上树脂柄或胶木柄即可。若是用于原种转接栽培种,或用于栽培种接种栽培袋(瓶)的接种锄,则要用直径为6~8毫米的钢筋或不锈钢棒等来制作,其长度约为28厘米。

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